バイオ実験のコツ

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ウエスタンブロット用化学発光基質の比較 -どれを使う?-

更新日:2020年1月17日

化学発光試薬(基質)とは?

ウエスタンブロット(Western Blot; Western Blotting; ウエスタンブロッティング; WB)を日常的に行われている研究者はたくさんいらっしゃるでしょう。ウエスタンブロットで欠かせない試薬のひとつに化学発光試薬があります。

化学発光試薬は、ペルオキダーゼ(peroxidase; POD; HRP)を発光させるルミノール反応を利用した試薬です。ウエスタンブロットではペルオキダーゼ標識された抗体の検出に使用されます。ECL(Enhanced Chemiluminescence)試薬とも呼ばれます。

なぜ化学発光試薬はたくさんある?

ウエスタンブロット用化学発光試薬は試薬メーカーが複数種類販売しています。ひとつの試薬メーカーが複数の発光試薬を販売する主な理由は、実験系によって適切な発光試薬の感度が異なるからです。

サンプル中の微量タンパク質を検出する場合、低感度の発光試薬を使うと露光時間(Exposure Time)を長く取っても検出できないことがあります。反対に、感度がさほどいらない実験系の場合、高感度の発光試薬を使うとシグナルが強すぎたりバックグラウンドが高くなったりします。

感度別に分類する

各試薬メーカーから販売されている化学発光試薬を感度の観点で分類しました。各社の製品紹介ページと私の使用経験に基づいて分類しています。

価格を比較しやすいように、容量はなるべく1,000cm2(ミニゲル約10枚分)を例示しています。

超高感度域

品名コードNo. メーカー容量価格
SuperSignal West Femto34095Thermo Fisher1,000cm275,300円
ECL Select RPN2235GEヘルスケア1,000cm250,500円
ImmunoStar LD292-69903富士フイルム和光純薬1,000cm230,000円

高感度域

品名コードNo.メーカー容量価格
SuperSignal™ West Dura34075Thermo Fisher1,000cm272,100円
Amersham ECL PrimeRPN2232 GEヘルスケア1,000cm235,800円
ImmunoStar Zeta 297-72403富士フイルム和光純薬1,000cm230,000円
Chemi-Lumi One Ultra11644-40ナカライテスク1,000cm249,000円

中感度域

品名コードNo.メーカー容量価格
SuperSignal™ West Pico PLUS34577Thermo Fisher2,000cm238,700円
Pierce™ ECL Plus32132Thermo Fisher1,000cm2(100mL)44,600円
ImmunoStar Reagents295-55201富士フイルム和光純薬1,000cm230,000円
Chemi-Lumi One Super02230-30ナカライテスク1,000cm229,700円

低感度域

品名コードNo.メーカー容量価格
Pierce™ ECL32209Thermo Fisher2,000cm2(250mL)24,500円
Amersham ECLRPN2109GEヘルスケア1,000cm211,800円
Chemi-Lumi One L07880-54ナカライテスク800cm28,000円

発光安定性も重要

ウエスブロット用化学発光試薬は、ペルオキダーゼ標識抗体と反応させてから1-2分後に発光強度のピークに到達します。その後の発光強度は低下する一方です。そのため、画像を何枚も撮影していると、時間経過とともに露光時間を長く設定しても予想よりシグナルが低くなります。

そのような現象をなるべく避けるには、発光安定性の高さを特長としているSuperSignal™ West DuraやImmunoStar® Zetaを使うのがよいでしょう。

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